ASP2人胚胎肾转化价格

2014 年 3 月 7 日3690

ASP2人胚胎肾转化基本特性:
(1)原代细胞培养末期液氮冻存。
(2)每冻存管细胞数:>5×105 cells/1ml。
(3)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
(4)代数:2-4代。
(5)用途:只可用于科研。
对于贴壁生长的ASP2人胚胎肾转化细胞,相对来说比较简单但很麻烦。以下主要讨论贴壁生长的细胞。
在讨论之前,大家首先要有一个概念,即洁净区,并不是没有细菌,而是细菌的数量非常少,国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米,沉降菌数不得超过1个每培养皿。而国外的标准比我国的还要高一点,要求的数量更少。所以在我们的洁净操作台里,并不是真正一个细菌都没有的,所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。
所以处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!
1)将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。
2)继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。
3)继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。
4)重复步骤3再洗。
5)重复步骤3再洗。
6)加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
7)加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
8)再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。
9)加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。
10)24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗。
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