这两周一直在做Taxol-SA接D的实验，其中碰到了很多问题，也学到了很多知识，受到了很多启发。首先在王晋那边借了点天冬氨酸（ASP,D）,开始用DMSO溶，用DIEA调PH，没溶。然后发现是晶体，就用水溶，然后奢侈地用DIEA调PH（严重错误，后来被师兄说成一看就知道是没学过化学的。当时本科毕业答辩完之后，吴文华老师跟我说出去了要给东华争光，但是来了南开之后，我不会过柱子、不会萃取，尽给东华丢脸了，感觉东华材料学院毕业的学生化学技术还不如南开生物专业的学生。）,发现挺容易溶。然后按着师兄师姐的建议，把溶有活化酯的DMSO溶液缓慢地滴加到搅拌着的D水溶液中，Taxol很快从体系中析出。然后请教大师兄，大师兄立马把小瓶中的反应液转到大烧瓶中，往里面加了大量的水，加了一些NaHCO3调PH。然后我又跑去王晋实验室拿了他们最后一瓶丙酮，往反应液中加了一些丙酮后，体系变澄清了，过夜反应。第二天旋走丙酮，但是还剩下很多水，而且Taxol-SA-D又从水中析出来了，根本没法用HPLC分离。接着冻干，冻干完了用DMSO溶固体，调PH，发现还是不能完全溶解，根本没法过膜。然后采用离心的方法，取上清液用HPLC分，下面的沉淀反复这种方法，但是我怕麻烦，就全扔了，浪费了100mg的Taxol。

然后采用SPPS合成D粉末，结果发现D在DMSO、DMF、DCM、Acetone等溶剂中均难溶解，而在水中加点NaHCO3立马溶解。然后我想其他的氨基酸是不是也都易溶于水，而难溶于有机溶剂，第二天上网一查果真如此，但是不知道原理。另外又产生了新的更大的疑问，为什么Fmoc-Asp（OtBu）-OH能溶于DMF，还有之前做过的二肽EE为什么能轻易地溶于DMF？有机知识实在匮乏，希望有高手能解释其中道理。

时间已经接近凌晨1点了，我就把之前用DMF溶的氨基酸D全部加到了活化酯中，然后又狠命地加了四管大概8ml的DMF，让悬浮液过夜反应。第二天早上一走mass，发现反应结果相当的好，D基本上都接到了Taxol上，只是溶液还是很浑浊的，过滤的时候又要费老大劲了。我想也许这是制备Taxol-SA-D的比较好的方法了吧！还有希望后续实验顺利！

凌晨一点多默默地走在静静的南开园里，也是一种享受！

王玉刚 2013/12/23 于八里台南开园新生物站A308 Yang Lab

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